Digital provkvantifiering genom PCR på nanoliterdroppar

Normal

0

0

2

false

false

false

EN-US

JA

X-NONE

MicrosoftInternetExplorer4

st1:*{behavior:url(#ieooui) }

/* Style Definitions */

table.MsoNormalTable

{mso-style-name:"Normal tabell";

mso-tstyle-rowband-size:0;

mso-tstyle-colband-size:0;

mso-style-noshow:yes;

mso-style-priority:99;

mso-style-qformat:yes;

mso-style-parent:"";

mso-padding-alt:0mm 5.4pt 0mm 5.4pt;

mso-para-margin:0mm;

mso-para-margin-bottom:.0001pt;

mso-pagination:widow-orphan;

font-size:10.5pt;

mso-bidi-font-size:11.0pt;

font-family:"Century","serif";

mso-ascii-font-family:Century;

mso-ascii-theme-font:minor-latin;

mso-hansi-font-family:Century;

mso-hansi-theme-font:minor-latin;

mso-bidi-font-family:"Times New Roman";

mso-bidi-theme-font:minor-bidi;

mso-font-kerning:1.0pt;}

Nanoreaktioner. Bakom den nya Droplet digital PCR-system finns en idé om att kunna utföra exakt kvantifiering av prover i en analys motsvarande realtids-PCR. Systemet som lanseras av företaget Quantalife utgörs av två centrala komponenter. En droppgenerator delar upp det prov som ska analyseras i nanoliterstora vattendroppar i en oljeemulsion, runt 20 000 droppar fås alltså utav 20 mikroliter prov. Dropparna utsätts sedan för en amplifiering av realtids-PCR-karaktär med traditionella fluorescensgenererande reagens, och efter det att PCR-reaktionen är färdig strömmas de igenom en fluorescensdetektor. Varje droppe analyseras nu med avseende på om den avger en positiv eller negativ signal för den RNA- eller DNA-molekyl som skulle amplifieras, vilket med hjälp av statistisk beräkning gör att mängden av målmolekylen i ursprungsprovet kan bestämmas. Analyser av expressionsnivåer med mera kan på så sätt utföras genom en digital kvantifiering som mycket påminner om det man uppnår i moderna DNA-sekvenseringssystem, men här med begränsningen att endast en målmolekyl kan analyseras per reaktion.

.